外泌体分离提取方法有以下几种：

1. 超速离心

2. 磁珠捕获

1）免疫磁珠法：该方法将CD63/CD81/CD9等抗体与磁珠结合，利用抗原-抗体原理捕获外泌体囊泡外的膜蛋白。

2）PS亲和磁珠法：该方法将PS（磷脂酰丝氨酸）与磁珠结合，利用亲和原理捕获外泌体囊泡外的PS。

3. 超滤

4. 多聚物沉淀法：聚乙二醇（PEG）为常用的多聚物，可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀。

外泌体的不同提取方法比较

外泌体的鉴定方法

外泌体的鉴定是继分离后又一个困扰研究者的问题，一般研究者需要通过：

1. 透射电镜观测样本中是否存在外泌体样结构（通常为茶托型或一侧凹陷的半球形）。

外泌体电镜成像经典图

（Théry一定是个完美主义者）

Théry, Clotilde, et al. "Isolation and characterization of exosomes from cell culture supernatants and biological fluids." Current protocols in cell biology(2006): 3-22.

2. 通过粒子直径分析系统测算和统计样品中粒子的直径分布。

纳米颗粒跟踪分析（Nanoparticle Tracking Analysis，NTA），原理是对每个颗粒的布朗运动进行追踪和分析，结合Stockes-Einstein方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。NTA技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一；相较于其他表征方式，NTA技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。

2. 通过western blot检测样品中是否有外泌体相关marker蛋白的富集。

脂肪组织巨噬细胞

Cell. 2017 Oct 5;171(2):372-384

频率高的指标：CD63、Tsg101、 CD9和CD81

常见指标：Alix、 HSP70、 flotillin 和Syntenin；

其他指标：HSP90、LAMP2B、LMP1、ADAM10、nicastrin、AChE、AQP2、RPL5、a-1AT 等。